Ons het verlede week verskeie oorwegings gedeel vir die gebruik van sellulose-asetaatmembraanelektroforese, en ons sal hierdie onderwerp vandag hier voltooi vir u verwysing.
Keuring van Buffer konsentrasie
Die bufferkonsentrasie wat in sellulose-asetaatmembraanelektroforese gebruik word, is oor die algemeen laer as dié wat in papierelektroforese gebruik word.Die algemeen gebruikte pH 8.6Barbitale buffer word tipies gekies binne die reeks van 0.05 mol/L tot 0.09 mol/L.By die keuse van die konsentrasie word 'n voorlopige bepaling gemaak.Byvoorbeeld, as die lengte van die membraanstrook tussen die elektrodes in die elektroforesekamer 8-10cm is, word 'n spanning van 25V vereis per sentimeter membraanlengte, en die stroomintensiteit moet 0,4-0,5 mA per sentimeter membraanwydte wees.Indien hierdie waardes nie tydens elektroforese bereik of oorskry word nie, moet die bufferkonsentrasie verhoog of verdun word.
'n Oormatige lae bufferkonsentrasie sal 'n vinnige beweging van die bande en 'n toename in bandwydte tot gevolg hê.Aan die ander kant sal 'n buitensporige hoë bufferkonsentrasie die bandmigrasie vertraag, wat dit moeilik maak om sekere skeidingsbande te onderskei.
Daar moet kennis geneem word dat in sellulose-asetaatmembraanelektroforese 'n beduidende deel van die stroom deur die monster gelei word, wat 'n aansienlike hoeveelheid hitte genereer.Soms kan die gekose bufferkonsentrasie as toepaslik beskou word.Onder toestande van verhoogde omgewingstemperatuur of wanneer hoër spanning gebruik word, kan die verdamping van water as gevolg van die hitte egter verskerp, wat 'n buitensporige hoë bufferkonsentrasie tot gevolg het en selfs die membraan laat uitdroog.
Voorbeeldvolume
In sellulose-asetaatmembraanelektroforese word die hoeveelheid monstervolume bepaal deur verskeie faktore, insluitend elektroforesetoestande, eienskappe van die monster self, kleurmetodes en opsporingstegnieke.As 'n algemene beginsel, hoe meer sensitief die opsporingsmetode is, hoe kleiner kan die monstervolume wees, wat voordelig is vir skeiding.As die monstervolume buitensporig is, is die elektroforetiese skeidingspatrone moontlik nie duidelik nie, en kleuring kan ook tydrowend wees.Wanneer die geskeide gekleurde bande egter kwantitatief ontleed word deur gebruik te maak van elueringskolorimetriese opsporingsmetodes, moet die monstervolume nie te klein wees nie, aangesien dit laer absorpsiewaardes vir sekere komponente tot gevolg kan hê, wat lei tot hoër foute in die berekening van hul inhoud.In sulke gevalle moet die monstervolume gepas verhoog word.
Tipies wissel die monstervolume bygevoeg op elke sentimeter van die monstertoedieningslyn van 0.1 tot 5 μL, gelykstaande aan 'n monsterhoeveelheid van 5 tot 1000 μg.Byvoorbeeld, in roetine-serumproteïenelektroforese-analise, oorskry die monstervolume bygevoeg op elke sentimeter van die toedieningslyn gewoonlik nie 1 μL nie, gelykstaande aan 60 tot 80 μg proteïen.Wanneer lipoproteïene of glikoproteïene met dieselfde elektroforesemetode ontleed word, moet die monstervolume egter dienooreenkomstig verhoog word.
Ten slotte moet die mees geskikte monstervolume gekies word gebaseer op spesifieke toestande deur middel van 'n reeks voorlopige eksperimente.
Seleksie van kleuroplossing
Die geskeide bande in sellulose-asetaat membraanelektroforese word tipies gekleur voor opsporing.Verskillende monsterkomponente vereis verskillende kleurmetodes, en die kleurmetodes wat geskik is vir sellulose-asetaatmembraanelektroforese is dalk nie heeltemal van toepassing op filtreerpapier nie.
Daar is drie hoofbeginsels om 'n kleuroplossing te kiessellulose asetaat membraan.Eerstens,Wateroplosbare kleurstowwe moet bo alkoholoplosbare kleurstowwe verkies word om membraankrimping en vervorming veroorsaak deur laasgenoemde se kleuroplossing te vermy.Na kleuring is dit belangrik om die membraan met water te spoel en die kleurtyd te verminder.Andersins kan die membraan krul of gekrimp word, wat die daaropvolgende opsporing sal beïnvloed.
Tweedens is dit verkieslik om kleurstowwe met sterk kleuringsaffiniteit vir die monster te kies.In sellulose-asetaatmembraanelektroforese van serumproteïene word aminoswart 10B algemeen gebruik as gevolg van sy sterk kleuringsaffiniteit vir verskeie serumproteïenkomponente en sy stabiliteit.
Derdens moet betroubare kwaliteit kleurstowwe gekies word.Sommige kleurstowwe, ten spyte daarvan dat hulle dieselfde naam het, kan onsuiwerhede bevat wat lei tot 'n besonder donker agtergrond na kleuring.Dit kan selfs die oorspronklike goed geskei bande vervaag, wat dit moeilik maak om te onderskei.
Laastens is die keuse van kleuroplossingkonsentrasie belangrik.Teoreties kan dit lyk asof 'n hoër kleuroplossing konsentrasie sal lei tot meer deeglike kleuring van monster komponente en beter kleur resultate.Dit is egter nie die geval nie.Die bindingsaffiniteit tussen die monsterkomponente en die kleurstof het 'n sekere limiet, wat nie toeneem met die toename in kleuroplossingkonsentrasie nie.Inteendeel, 'n buitensporige hoë konsentrasie van kleuroplossing mors nie net die kleurstof nie, maar maak dit ook moeilik om 'n duidelike agtergrond te verkry.Boonop, wanneer die kleurintensiteit 'n sekere maksimum waarde bereik, volg die kleurstof se absorpsiekurwe nie 'n lineêre verwantskap nie, veral in kwantitatiewe metings.In sellulose-asetaatmembraanelektroforese is die kleuroplossingskonsentrasie oor die algemeen laer as wat in papierelektroforese gebruik word.
Besonderhede om te weet oor Beijing Liuyi Biotegnologie's sellulose asetaat membraanelektroforese tenk en sy elektroforese toepassing, besoek asseblief hier:
lEksperimenteer vir die skeiding van serumproteïen deur sellulose-asetaatmembraan
lSellulose-asetaat-membraanelektroforese
As jy enige aankoopplan vir ons produkte het, moet asseblief nie huiwer om ons te kontak nie.Jy kan vir ons boodskap stuur by e-pos[e-pos beskerm]of[e-pos beskerm], of skakel ons asseblief by +86 15810650221 of voeg Whatsapp +86 15810650221 by, of Wechat: 15810650221.
Verwysing:Elektroforese (Tweede uitgawe) deur mnr. Li
Postyd: Jun-06-2023