Beginsel
Sellulose-asetaatfilmelektroforese is 'n elektroforesemetode wat 'n sellulose-asetaatfilm as 'n ondersteuning gebruik.Die verskynsel waarin gelaaide deeltjies onder die werking van 'n elektriese veld na die teenoorgestelde elektrode beweeg, word elektroforese genoem.Aangesien elke proteïen 'n spesifieke iso-elektriese punt het, as 'n proteïen in 'n oplossing geplaas word met 'n pH laer as sy iso-elektriese punt, sal die proteïen positief gelaai wees en na die negatiewe elektrode beweeg.Inteendeel, dit beweeg na die positiewe pool.Omdat die spoed van proteïenmolekules wat in 'n elektriese veld beweeg verband hou met hul lading, die vorm en grootte van die molekules, kan verskillende proteïene deur elektroforese geskei word.Serum bevat 'n verskeidenheid proteïene, wat almal iso-elektriese punte by pH7.5 of minder het.Wanneer serum in pH 8.6 buffer geplaas word om elektroforese uit te voer, is alle serumproteïene negatief gelaai en sal na die positiewe kant in die elektriese veld beweeg.Aangesien verskeie serumproteïene verskillende ladings by dieselfde pH het, is die molekulêre deeltjies verskillend in grootte, en dus is die migrasiespoed anders, en word hulle deur elektroforese geskei.Die iso-elektriese punte en molekulêre gewigte van serumproteïene word in die tabel hieronder getoon:
| Proteïen | Iso-elektriese punte (PI) | Molekulêre gewig |
| Albumien | 4,88 | 69 000 |
| α1-gloulien | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulien | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulien | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-gloulien | 6,85~7,50 | 156 000~ 300 000 |
Die eksperiment is om verskillende proteïene in bloedserum te skei met sellulose-asetaatmembraan (afkorting CAM) as ondersteuningsmedia.CAM is 'n soort skuim losefilm met goeie uniform, en die dikte is 0.1mm-1.5mm, wat 'n sekere waterabsorpsie het.
Materiale, instrumente en reagense vir CAM-elektroforese
Voorbeelde:gesonde menslike bloedserum
Instrument:kragtoevoer DYY-6C, elektroforese tenk DYCP-38C, superieure monsterlaai WD-9404
Die reagense
1) sellulose asetaat membraan 7X9cm
2) PH 8.6 barbitol bufferoplossing (ioniese sterkte 0.05-0.09, dit is 0.06tyd tyd.): neem 1,84g Diethyl barbituursuur, en neem dan 1.03g Diethyl natrium pentobarbital, voeg 'n bietjie gedistilleerde water by om te verhit om op te los, en maak tot 1000ml;
3) Vlek: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, voeg 100ml gedistilleerde water by;
4) TBS/T of PBS/T: 45ml 95% etanol, 5ml ysasynsuur, voeg 50ml gedistilleerde water by;
5) Skoonmaakoplossing: 70ml watervrye etanol, 30ml ysasynsuur.
Eksperimenteer metoded
1) Berei die membraan voor: Dompel die membraan in die barbitolbufferoplossing 30min-8h, en haal dit uit, verwyder die ekstra oplossing met absorberende papier.
2) Laai monsters: Onderskei die growwe kant en gladde kant van die membraan, en merk 'n lyn op 1.5cm afstand na die boonste punt op die growwe kant.Laai monsters met uitstekende monsterlaai-instrument op die growwe kant.Let wel: Die monsters moet op die growwe kant van die membraan gelaai word.Nadat die serummonsters ten volle in die membraan binnegedring is, draai die membraan om, sit die growwe kant (met monsters) na onder na die tenk, en die punt met monsters word in negatiewe elektrode geplaas.
3) Elektroforese: Skakel die kragtoevoer aan, 0.4～0.6m A/cm membraan, die looptyd is 30-45 min.Nadat u elektroforese uitgevoer het, skakel die krag af.
4) Vlek en maak skoon: Haal die membraan uit die tenk, en dompelit in die kleurstofoplossing vir 5 min, en maak dit dan 3-4 keer oor en oor in die skoonmaakoplossing skoon totdat die agtergrondkleur helder is.Die serumproteïene moet op die bande getoon word, en normaalweg is daar vyf sones, vorm bo-end tot die gemerkte lyn, Albumien, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Bewaring: sit die droë elektroforesebandin skoonmaakoplossing vir 10-15 minute, en haal dit dan uit en plak dit op 'n skoon glas, nadat dit droog is, sal dit 'n deursigtige film wordband.
EksperimenteerResultaat
Die skeidingseffek van serummonsters is goed, en daar is geen bandstertverskynsel nie.Die herhaalbaarheid van die resultate verskil vanweë die toetsprosedures en die metodes van die eksperimenteerder, en die herhaalbaarheid is hoog.
Afsluiting
Die vinnige kliniese elektroforese-opsporingstelsel (Elektroforese tenkDYCP-38C,kragtoevoerDYY-6C en superieure monsterlaai WD-9404) vervaardig deur onsmaatskappy Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdvoldoen aan die eksperimentele vereistes,endie resultate is reproduceerbaar, eenvoudig en vinnig, geskik vironderrignavorsing.
Beijing LiuyiBiotechnology Co., Ltd spesialiseer in die vervaardiging van elektroforese produkte vir die lewenswetenskap industrie, wathet meer as 50 jaar geskiedenis in China en die maatskappy kan stabiele en hoë kwaliteit produkte regoor die wêreld verskaf.Deur jare se ontwikkeling is dit jou keuse werd!
Ons is nou op soek na vennote, beide OEM elektroforese tenk en verspreiders word verwelkom.
Vir meer inligting oor ons, kontak ons asseblief per e-pos[e-pos beskerm]of[e-pos beskerm].
Postyd: 14 Nov 2022