Wat is poliakrielamiedgelelektroforese?

Poliakrielamied Gel Elektroforese

Gelelektroforese is 'n fundamentele tegniek in laboratoriums oor die biologiese dissiplines, wat die skeiding van makromolekules soos DNA, RNA en proteïene moontlik maak.Verskillende skeidingsmedia en meganismes laat subversamelings van hierdie molekules meer effektief geskei word deur hul fisiese eienskappe te ontgin.Vir veral proteïene is poliakrielamiedgelelektroforese (PAGE) dikwels die tegniek van keuse.

PAGE is 'n tegniek wat makromolekules soos proteïene skei op grond van hul elektroforetiese mobiliteit, dit wil sê die vermoë van analiete om na 'n elektrode van die teenoorgestelde lading te beweeg.In PAGE word dit bepaal deur die lading, grootte (molekulêre gewig) en vorm van die molekule.Analiete beweeg deur porieë wat in poliakrielamiedgel gevorm word.Anders as DNA en RNA, wissel proteïene in lading volgens die aminosure wat ingewerk is, wat kan beïnvloed hoe hulle loop.Aminosuurstringe kan ook sekondêre strukture vorm wat hul oënskynlike grootte beïnvloed en gevolglik hoe hulle deur die porieë kan beweeg.Dit kan dus soms wenslik wees om proteïene te denatureer voor elektroforese om hulle te lineariseer indien 'n meer akkurate skatting van grootte vereis word.

SDS BLADSY

Natrium-dodesielsulfaat-poliakrielamiedgelelektroforese is 'n tegniek wat gebruik word om proteïenmolekules van massas 5 tot 250 kDa te skei.Die proteïene word slegs op grond van hul molekulêre gewig geskei.Natriumdodesielsulfaat, 'n anioniese oppervlakaktiewe middel, word bygevoeg in die voorbereiding van gels wat die intrinsieke ladings van die proteïenmonsters masker en hulle 'n soortgelyke lading tot massaverhouding gee.In eenvoudige woorde, dit denatureer die proteïene en gee hulle 'n negatiewe lading.

Inheemse BLADSY

Native PAGE is 'n tegniek wat nie-gedenatureerde gels gebruik vir die skeiding van proteïene.Anders as SDS PAGE, word geen denaturerende middel by die voorbereiding van gels bygevoeg nie.Gevolglik vind die skeiding van proteïene plaas op grond van lading en grootte van die proteïene.In hierdie tegniek is die konformasie, vou en aminosuurkettings van die proteïene die faktore waarvan die skeiding afhanklik is.Die proteïene word nie in hierdie proses beskadig nie, en kan na die voltooiing van skeiding herwin word.

Hoe werk poliakrielamiedgelelektroforese (PAGE)?

Die basiese beginsel van PAGE is om analiete te skei deur dit deur die porieë van 'n poliakrielamiedgel te laat deur 'n elektriese stroom te gebruik.Om dit te bereik, word 'n akrielamied-bisakrielamied-mengsel gepolimeriseer (poliakrielamied) deur die byvoeging van ammoniumpersulfaat (APS).Die reaksie, wat deur tetrametieletileendiamien (TEMED) gekataliseer word, vorm 'n netagtige struktuur met porieë waardeur analiete kan beweeg (Figuur 2).Hoe hoër die persentasie totale akrielamied wat in die jel ingesluit is, hoe kleiner is die poriegrootte, dus hoe kleiner is die proteïene wat sal kan deurgaan.Die verhouding van akrielamied tot bisakrielamied sal ook 'n impak hê op die poriegrootte, maar dit word dikwels konstant gehou.Kleiner poriegroottes verminder ook die spoed waarteen klein proteïene deur die jel kan beweeg, wat hul resolusie verbeter en verhoed dat hulle vinnig in die buffer afloop wanneer stroom toegedien word.

Toerusting vir Polyacrylamide Gel Elektroforese

Gelelektroforesesel (tenk/kamer)
Die jeltenk vir poliakrielamiedgelelektroforese (PAGE) verskil van die agarosegeltenk.Die agarose-jeltenk is horisontaal, terwyl die PAGE-tenk vertikaal is.Deur vertikale elektroforesesel (tenk/kamer) word 'n dun gel (gewoonlik 1.0mm of 1.5mm) tussen twee glasplate gegooi en so gemonteer dat die onderkant van die jel in buffer in een kamer ondergedompel word en die bokant in buffer ondergedompel word. in 'n ander kamer.Wanneer stroom toegepas word, migreer 'n klein hoeveelheid buffer deur die jel vanaf die boonste kamer na die onderste kamer.Met sterk klampe om te verseker dat die samestelling in 'n regop posisie bly, fasiliteer die toerusting vinnige gellope met eweredige verkoeling wat duidelike bande tot gevolg het.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) vervaardig 'n reeks groottes poliakrielamied-gelelektroforese selle (tenks/kamers).Die modelle DYCZ-20C en DYCZ-20G is vertikale elektroforese-selle (tenks/kamers) vir DNA-volgordebepalingsanalise.Sommige van die vertikale elektroforese selle (tenks/kamers) is versoenbaar met kladstelsel, soos die model DYCZ-24DN, DYCZ-25D en DYCZ-25E versoenbaar is met die Western Blotting stelsel model DYCZ-40D, DYCZ-40G en DYCZ-40F, wat gebruik word vir die oordrag van die proteïenmolekule van die gel na membraan.Na SDS-PAGE elektroforese is Western Blotting 'n tegniek om 'n spesifieke proteïen in 'n proteïenmengsel op te spoor.U kan hierdie kladstelsels kies volgens die eksperimentele vereistes.

Elektroforese kragtoevoer
Om die elektrisiteit te verskaf om die gel te laat loop, sal jy 'n elektroforese-kragbron nodig hê.By Liuyi Biotechnology verskaf ons 'n reeks elektroforese-kragbronne vir alle toepassings.Die model DYY-12 en DYY-12C met 'n hoë stabiele spanning en stroom kan voldoen aan hoë spanning vereiste elektroforese.Dit het die funksie van staanplek, tydsberekening, VH en stap-vir-stap toepassing.Hulle is ideaal vir IEF- en DNA-volgordebepaling elektroforese toepassing.Vir algemene proteïen- en DNA-elektroforese-toepassing het ons die model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, ensovoorts, wat ook warm verkoopskragbronne met elektroforese-selle (tenks/kamers) is.Dit kan gebruik word vir die middel- en laespanning elektroforese toepassings, soos vir skoollaboratoriumgebruik, hospitaallaboratorium ensovoorts.Meer modelle vir kragbronne, besoek asseblief ons webwerf.

Die Liuyi-handelsmerk het meer as 'n 50-jarige geskiedenis in China en die maatskappy kan stabiele produkte van hoë gehalte regoor die wêreld verskaf.Deur jare se ontwikkeling is dit jou keuse werd!

Vir meer inligting oor ons, kontak ons ​​asseblief per e-pos[e-pos beskerm] or [e-pos beskerm].

Verwysings vir Wat is poliakrielamiedgelelektroforese?
1. Karen Steward PhD poliakrielamiedgelelektroforese, hoe dit werk, tegniekvariante en die toepassings daarvan