Comet Assay (Single Cell Gel Electrophorese, SCGE) is 'n sensitiewe en vinnige tegniek wat hoofsaaklik gebruik word om DNA-skade op te spoor en te herstel in individuele selle. Die naam "Comet Assay" kom van die kenmerkende komeetagtige vorm wat in die resultate voorkom: die kern van die sel vorm die "kop", terwyl die beskadigde DNS-fragmente migreer, wat 'n "stert" skep wat soos 'n komeet lyk.
Beginsel
Die beginsel van die Comet Assay is gebaseer op die migrasie van DNA-fragmente in 'n elektriese veld. Ongeskonde DNS bly binne die selkern, terwyl beskadigde of gefragmenteerde DNS na die anode migreer en die komeet se "stert" vorm. Die lengte en intensiteit van die stert is direk eweredig aan die omvang van DNA-skade.
Prosedure
- Sel Voorbereiding: Selle wat getoets moet word, word met lae-smeltpunt agarose gemeng en op mikroskoopskyfies versprei om 'n eenvormige laag te vorm.
- Sel Lysis: Die skyfies word in 'n lisis-oplossing gedompel om die selmembraan en kernmembraan te verwyder, wat die DNA blootstel.
- Elektroforese: Die skyfies word in 'n elektroforesekamer onder alkaliese of neutrale toestande geplaas. Beskadigde DNA-fragmente migreer na die positiewe elektrode onder die invloed van die elektriese veld.
- Kleuring: Na elektroforese word die skyfies met 'n fluoresserende kleurstof (bv. etidiumbromied) gekleur om die DNA te visualiseer.
- Mikroskopiese Analise: Met 'n fluoressensiemikroskoop of gespesialiseerde sagteware word die komeetvorms ontleed, en parameters soos stertlengte en intensiteit gemeet.
Beeld van biorender
Data Analise
Resultate van die Comet Assay word geëvalueer op grond van verskeie sleutelparameters:
- Stert Lengte: Verteenwoordig die afstand wat die DNA migreer, wat die omvang van DNA-skade aandui.
- Stert DNA-inhoud: Die persentasie DNS wat in die stert migreer, dikwels gebruik as 'n kwantitatiewe maatstaf van DNS-skade.
- Olyfstertoomblik (OTM): Kombineer beide stertlengte en stert-DNA-inhoud om 'n meer omvattende maatstaf van DNA-skade te verskaf.
Aansoeke
- Genotoksisiteitstudies: Die Comet Assay word wyd gebruik om die uitwerking van chemikalieë, dwelms en bestraling op sel-DNS te bepaal, wat dit 'n sleutelinstrument maak vir genotoksisiteitstoetsing.
- Omgewingstoksikologie: Dit help met die ontleding van die impak van omgewingsbesoedelende stowwe op die DNA van organismes, wat insigte oor ekosisteemveiligheid verskaf.
- Mediese en kliniese navorsing: Die Comet Assay word gebruik om DNS-herstelmeganismes, kanker en ander DNS-verwante siektes te bestudeer. Dit evalueer ook die impak van kankerterapieë soos radioterapie en chemoterapie op DNA.
- Voedsel- en Landbouwetenskappe: Word gebruik om die veiligheid van plaagdoders, voedselbymiddels en ander stowwe te assesseer, en om hul toksiese effekte in dieremodelle te bestudeer.
Voordele
- Hoë sensitiwiteit: In staat om lae vlakke van DNA-skade op te spoor.
- Eenvoudige operasie: Die tegniek is eenvoudig, wat dit geskik maak vir hoë-deurset sifting.
- Wye toepassing: Dit kan op verskeie seltipes toegepas word, insluitend dier- en plantselle.
- Kwantifiseringsuitdagings: Terwyl die verskaffing van kwalitatiewe data oor DNA-skade, maak kwantitatiewe analise baie staat op sagteware en beeldontledingstegnieke.
- Eksperimentele Toestande: Resultate kan beïnvloed word deur faktore soos elektroforese tyd en pH, wat noukeurige beheer van eksperimentele toestande vereis.
Beperkings
Die Comet Assay is 'n onskatbare hulpmiddel in biomediese navorsing, omgewingswetenskap en geneesmiddelontwikkeling as gevolg van sy buigsaamheid en hoë sensitiwiteit in die opsporing en herstel van DNA-skade. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)bied horisontale elektroforesekamer vir komeettoets. Welkom om met ons te kontak om te bespreek oor dieKomeettoetsprotokol.
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) spesialiseer al meer as 50 jaar in die vervaardiging van elektroforese-instrumente met ons eie professionele tegniese span en R&D-sentrum. Ons het betroubare en volledige produksielyn van ontwerp tot inspeksie, en pakhuis, sowel as bemarkingsondersteuning. Ons vernaamste produkte is Elektroforese Sel (tenk/kamer), Elektroforese Kragtoevoer, Blou LED Transilluminator, UV Transilluminator, Gel Image & Analysis System ens. Ons verskaf ook die laboratorium instrumente soos PCR instrument, vortex menger en sentrifuge vir laboratorium.
As jy enige aankoopplan vir ons produkte het, moet asseblief nie huiwer om ons te kontak nie. Jy kan vir ons boodskap stuur by e-pos[e-pos beskerm]of[e-pos beskerm], of skakel ons asseblief by +86 15810650221 of voeg Whatsapp +86 15810650221 by, of Wechat: 15810650221.
Skandeer asseblief die QR-kode om op Whatsapp of WeChat by te voeg.
Postyd: 20-20-2024