Gelelektroforese is een van die belangrikste metodes wat in molekulêre biologie gebruik word vir die ontleding van DNA. Hierdie metode behels die migrasie van fragmente van DNA deur 'n jel, waar hulle geskei word op grond van grootte of vorm. Het jy egter al ooit enige foute tydens jou elektroforese-eksperimente teëgekom, soos gesmeer bande op die agarose gel, of geen bande op die jel? Wat kan die oorsaak van hierdie foute wees?
Ons tegnici het 'n paar probleemoplossings hier opgesom vir u verwysing.
1. Smeer bande op agarose gel
●Die DNS is afgebreek. Vermy nuklease-kontaminasie.
● Die elektroforesebuffer is nie vars nie. Na herhaalde gebruik van elektroforesebuffer neem die ioniese sterkte af, en die pH-waarde daarvan neem toe, so die bufferkapasiteit verswak, wat die elektroforese-effek beïnvloed. Dit word aanbeveel om die elektroforesebuffer gereeld te vervang.
● Onbehoorlike elektroforese toestande is gebruik. Moenie toelaat dat spanning 20 V/cm oorskry nie, en handhaaf 'n temperatuur <30° C tydens elektroforese. Vir die reuse DNA-string elektroforese moet die temperatuur <15° C wees. Kyk of die elektroforese buffer genoeg bufferkapasiteit het.
● Te veel DNA is op die jel gelaai. Verminder die hoeveelheid DNA.
● Te veel sout in die DNA. Gebruik etanolpresipitasie om oortollige soute in gevorderde tyd te verwyder.
● Die DNA was met proteïen besmet. Gebruik fenol ekstraksies om proteïen in gevorderde te verwyder.
● Die DNA is gedenatureer. Moenie verhit voor elektroforese nie. Verdun DNA in buffer met 20 mM NaCl.
2. Anomalieë DNA-bandmigrasie
● Hernaturering van die COS-plek van λHind III-fragment. Verhit DNA vir 5 minute onder 65° C voor elektroforese, en verkoel dit dan op yseenheid vir 5 minute.
● Onbehoorlike elektroforese toestande is gebruik. Moenie toelaat dat spanning 20 V/cm oorskry nie, en handhaaf 'n temperatuur <30° C tydens elektroforese. Kyk of die elektroforesebuffer genoeg bufferkapasiteit het.
● Die DNA is gedenatureer. Moenie verhit voor elektroforese nie. Verdun DNA in buffer met 20 mM NaCl.
3. Dowwe of geen DNS-bande op agarosegel nie
● Daar was onvoldoende hoeveelheid of konsentrasie DNA op die jel gelaai. Verhoog die hoeveelheid DNA. Poliakrielamiedgelelektroforese is effens meer sensitief as agaroseelektroforese, en monsterlading kan toepaslik verminder word.
● Die DNS is afgebreek. Vermy nuklease-kontaminasie.
● Die DNA is van die jel af geëlektroforeer. Elektroforeer die gel vir minder tyd, gebruik 'n laer spanning, of gebruik 'n hoër persentasie gel.
● Onbehoorlike W-ligbron is gebruik vir visualisering van etidiumbromied-gekleurde DNA. Gebruik 'n kortgolflengte (254 nm) W-lig vir groter sensitiwiteit.
4. DNS-bande ontbreek
●Die klein grootte DNA is van die jel af geëlektroforeer. Elektroforeer die gel vir minder tyd, gebruik 'n laer spanning, of gebruik 'n hoër persentasie gel.
● Moeilik om die DNA-bande van soortgelyke molekulêre te onderskei. Verhoog die elektroforesetyd en kontroleer die konsentrasievan die gel om seker te maak dat die korrekte persentasie gel gebruik moet word.
● Die DNA is gedenatureer. Moenie verhit voor elektroforese nie. Verdun DNA in buffer met 20 mM NaCl.
● Die DNS-stringe is groot, en konvensionele gelelektroforese is nie geskik nie. Ontleed op pulsgelelektroforese.Watter ander probleme het jy met agarosegelelektroforese gehad? Ons sal in die toekoms meer navorsing doen vir gidse.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) is 'n gespesialiseerde maatskappy wat fokus op elektroforeseverwante produkte in China. Sy verhaal begin in 1970 toe China nog nie die hervorming en oopmaaktyd betree het nie. Deur jare se ontwikkeling het Liuyi Bitotech sy eie handelsmerk, wat bekend staan as die Liuyi-handelsmerk in die binnelandse mark vir elektroforeseprodukte.
Die Liuyi-handelsmerk het meer as 'n 50-jarige geskiedenis in China en die maatskappy kan stabiele produkte van hoë gehalte regoor die wêreld verskaf. Deur jare se ontwikkeling is dit jou keuse werd!
Die horisontale elektroforese selle (tenks/kamers) van Liuyi Biotech is van hoë gehalte met goeie voorkoms. Met verskillende groottes jelbakkies kan hulle aan jou verskillende eksperimentele vereistes voldoen. Ons het ons eie tegniese span en fabriek. Van ontwerp tot vervaardiging, die grondstowwe tot die sleutelonderdele, ons kan die hele proses beheer. Die DYCP 31-reeks is vir DNA-elektroforese, wat model isDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, enDYCP-31E. Die verskille tussen hulle is gel groottes en prys. Ons verskaf volle groottes produkte vir ons kliënte. Die modelDYCP-32Ckan die grootste gel 250mm * 250mm maak.
Intussen beveel ons ons elektroforese-kragbron aanDJJ-6C,DJJ-6DenDYY-10Cvir ons elektroforese selle (tenks/kamers) DYCP-31 en 32 reeks.
As jy meer inligting oor die produkte wil hê, besoek asseblief hierdie webwerf om meer te kry, en welkom om ons per e-pos te kontak om ons te laat weet wat jy wil hê, en kyk of ons die oplossings vir jou kan verskaf.
Vir meer inligting oor ons, kontak ons asseblief per e-pos[e-pos beskerm], [e-pos beskerm].
Postyd: Mei-09-2022