1. Klassifikasie
Gelelektroforese word verdeel in vertikale tipes (insluitend kolomgels en plaatgels) en horisontale tipes (hoofsaaklik plaatgels) (Figuur 6-18). Oor die algemeen is vertikale skeiding effens beter as horisontale, maar horisontale gelvoorbereiding het ten minste vier voordele: daar is ondersteuning onder die hele gel, wat die gebruik van lae-konsentrasie agarose moontlik maak; dit is moontlik om agarosegelplate met verskillende spesifikasies voor te berei; gelvoorbereiding en monsterlaai is geriefliker; die elektroforesekamer is maklik om te bou en koste-effektief. Aangesien horisontale elektroforese uitgevoer word met die agarosegelplaat ten volle ondergedompel ongeveer 1 mm onder die oppervlak van die elektroforesebuffer, word dit ook onderwaterelektroforese genoem.
Elektroforesetenk DYCP-31DN vir agarosegelelektroforese
2. Bufferstelsel
In nukleïensuurskeiding neem die meeste stelsels kontinue stelsels aan. Algemeen gebruikte elektroforesebuffers sluit in TBE (0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L boorsuur, 0.0024mol/L EDTA) buffer en THE (0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L natriumasetaat, 0,0018 mol/L EDTA) buffer. Hierdie buffers word gewoonlik voorberei as 10x voorraadoplossings en verdun tot die vereiste konsentrasie wanneer dit gebruik word. Die migrasietempo's van lineêre en sirkelvormige DNA in agarosegel wissel met die buffer wat gebruik word. In DIE buffer is die migrasietempo van lineêre DNA groter as dié van sirkelvormige DNA, terwyl in TBE-buffer die teenoorgestelde waar is.
3.Voorbereiding van Agarose Gel
(1) Voorbereiding van Horisontale Agarose Gel
(a) Berei die vereiste konsentrasie agarosegel voor deur 1x elektroforesebuffer te gebruik.
(b) Verhit die agarose tot volledige oplossing óf in 'n kookwaterbad, op 'n magnetiese roerder, óf in 'n mikrogolfoond. Verkoel die agarose-oplossing tot 55°C en voeg etidiumbromied (EB) kleurstof by tot 'n finale konsentrasie van 0,5 μg/ml.
(c) Verseël die rande van glas- of akrielplate met 'n klein hoeveelheid agarosegel, voeg 'n kam by en plaas die kamtande ongeveer 0.5~1.0 mm bokant die plaat.
(d) Gooi die gesmelte agarosegeloplossing voortdurend in die glas- of akrielplaatvorm (die dikte hang af van die volume van die DNS-monster), en vermy die inbring van lugborrels. Laat dit natuurlik stol by kamertemperatuur.
(e) Verwyder die kam versigtig na volledige stolling. Voeg 'n toepaslike hoeveelheid elektroforesebuffer by die jeltenk, en verseker dat die jelplaat ongeveer 1 mm onder die oppervlak van die elektroforesebuffer onder water is.
(2) Voorbereiding van Vertikale Agarose Gel
(a) Verwyder vet of oorblyfsels van glasplate deur met etanol te was.
(b) Plaas spasieerplate tussen voor- en agterdamme, bring die rande van die spasieerplate in lyn met die voor- en agterdamme, en maak dit met klampe vas.
(c) Voeg 2% agarose by in 1x buffer tussen die rande van die spasieerplate om 'n 1 cm hoë agarose prop aan die onderkant van die jel gietkamer te vorm.
(d) Gooi die gesmelte agarosegel by die verlangde konsentrasie, voorberei in 1x buffer, in die jelkamer tot 1 cm onder die bokant.
(e) Plaas die kam in, vermy om lugborrels onder die kamtande vas te vang. Soms kan plooie by die kamtande verskyn tydens afkoeling van agarosegel; in sulke gevalle, voeg net 'n bietjie gesmelte agarose aan die bokant by om dit te stol.
(f) Verwyder die kam. Om bufferlekkasie in die laaigleuf te voorkom, verseël die verbinding tussen die agarosegelplaat en die elektroforesekamer met 2% agarose en voeg die nodige hoeveelheid buffer by.
(g) Voeg 1x elektroforesebuffer by die jelkamer.
(h) Laai DNA-monsters versigtig op die agarosegel onder die buffer.
Meer inligting oor die basiese kennis oor agarosegelelektroforese, sal ons volgende week deel. Wens hierdie inligting is nuttig vir jou eksperiment.
Beijing Liuyi Biotechnology Co Ltd (Liuyi Biotechnology) spesialiseer al meer as 50 jaar in die vervaardiging van elektroforese-instrumente met ons eie professionele tegniese span en R&D-sentrum. Ons het betroubare en volledige produksielyn van ontwerp tot inspeksie, en pakhuis, sowel as bemarkingsondersteuning. Ons hoofprodukte is Elektroforese-sel (tenk/kamer), Elektroforese-kragtoevoer, Blou LED-verligter, UV-verligter, gelbeeld- en analisestelsel, ens.
Ons is nou op soek na vennote, beide OEM elektroforese tenk en verspreiders word verwelkom.
As jy enige aankoopplan vir ons produkte het, moet asseblief nie huiwer om ons te kontak nie. Jy kan vir ons boodskap stuur by e-pos[e-pos beskerm]of[e-pos beskerm], of skakel ons asseblief by +86 15810650221 of voeg Whatsapp +86 15810650221 by, of Wechat: 15810650221.
Skandeer asseblief die QR-kode om op Whatsapp of WeChat by te voeg.
Postyd: Des-07-2023